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【干货】沙眼衣原体泌尿生殖道感染——实验室诊断

来自  CUG  2020-01-07

沙眼衣原体的实验室检查包括病原学方法和非病原学方法。病原学方法包括衣原体直接镜检、衣原体培养、衣原体抗原检测(免疫层析法、酶联免疫法和直接免疫荧光法)、衣原体核酸检测(包括核酸探针杂交和PCR);非病原学方法包括衣原体抗体检测(用衣原体抗原检测血中特异的衣原体抗体)、组织病理和尿白细胞计数。本篇内容主要介绍分离培养与鉴定、药敏试验、抗体检测。


1.分离培养与鉴定


细胞培养法用于分离培养衣原体,敏感性70%~90%,特异性达99%,此法对技术和设备要求较高且费用昂贵,培养有一定难度,也可能出现假阴性。因此不适合大样本病例。


(1)鸡胚分离培养


1907年捷克学者Harberstaedter和von Prowazek发现衣原体开始,各国学者都致力于衣原体的分离纯化,但半个世纪内,由于有可能将某些发光颗粒(白细胞、上皮细胞、色素颗粒)、细菌和酵母菌误认为沙眼衣原体,因此此法对于实验人员的技术水平要求较高。以后,我国著名微生物学家汤飞凡教授用鸡胚分离的经典方法首次分离成功,从而将衣原体的研究推向了新的高潮。卵黄囊培养对衣原体的早期分离功不可没,但阳性率低,自有细胞培养后,临床基本不再使用。


(2)细胞分离培养


C.t是专性的细胞内寄生物,它只能在细胞中生长,McCoy细胞(小鼠成纤维瘤细胞)提供了衣原体生长繁殖的必备条件,因此,常用它来进行培养和检测。传统的细胞培养法阴性标本盲传一代后仍为阴性,即确诊为阴性。然而有研究报道在一些有经验的实验室,增加传代培养的次数会明显提高沙眼衣原体泌尿生殖道感染的检出率。目前,单层细胞和培养基均有商品供应,虽费用较高,但很容易获得,另外常用的还有HeLa229细胞、BHK21细胞、MCF7,HaCaT细胞和HL细胞株等。细胞培养法一直是沙眼衣原体实验室检查的金标准,然而由于敏感性相对较低,不同实验室检出的阳性率差别较大,而且耗时、费钱,需要一定的实验设备,不适用于临床门诊中大量患者的实验室检查。


(3)衣原体微量快速培养法


很多学者对衣原体细胞培养方法做了改进,细胞培养由玻璃瓶改为试管,由试管改为微量快速的96孔板,同时也有改为适用于一般实验室的平皿法。


2.药敏试验


日本化学疗法学会1992年建立的衣原体最低抑菌浓度(MIC)测定方法是参照衣原体属国际通用的测定法而制定的标准法,在我国尚未建立衣原体的药敏试验标准法。


3.抗体检测


人体感染衣原体后,产生相应抗衣原体抗体,检测这些特异性抗体可确定有无衣原体感染。检测血清抗体不同种类的临床意义也不尽相同。抗衣原体IgM抗体在成人生殖道感染并不常见;抗衣原体IgG抗体阳性率在性活跃人群高,尽管可以无活动性感染,既往感染足以引起阳性;而衣原体特异性血清IgA抗体则与疾病活动存在统计学相关性。用于各型衣原体感染的血清学试验包括补体结合试验、微量免疫荧光试验、间接免疫荧光和酶免疫吸附试验等。微量免疫荧光试验和补体结合试验常用。血清学方法对诊断生殖道衣原体感染的合并症有意义。患输卵管炎或肝周围炎的女性或患附睾炎的男性患者血清抗体滴度非常高。此外,用酶免疫法测定衣原体抗体和微量免疫荧光法一样敏感,但不能用于新近感染。


血清学试验的诊断价值有局限性:①到目前为止还没有一种试验能完全适用于所有种类衣原体感染;②由于感染早期症状较轻微,往往错过急性期标本的采集时间;③由于血清抗体可持续很长时间,单一血清标本检测到的抗体只能说明以前感染过衣原体,只有当恢复期血清抗体与急性期抗体相比滴度有4倍增高并伴有临床症状时才支持目前有衣原体感染。由于敏感性、特异性、预测值不够理想,血清学检查不建议作为临床诊断疾病的活动性的手段。


目前没有一个同时具备快速、特异性、敏感、价廉等特点的检测,再加上沙眼衣原体泌尿生殖道感染临床表现隐匿,及时诊治变得很困难。目前的检测标本采集主要是尿道和生殖道分泌物(表1、表2),而近年很多研究提示,衣原体感染的胃肠道定植可能是衣原体感染复发的重要原因,衣原体感染标本采集的困难也是衣原体诊治难点之一。


不同部位标本化验方法的选择:


表1:男性衣原体泌尿生殖道感染诊断


表2:女性衣原体泌尿生殖道感染诊断


需要强调的是:尽管我们在男性前列腺、附睾、盆腔、输卵管部位需要发现衣原体,才能确定这些部位的病变是由衣原体感染引起,但实际上发现病原菌的概率并不高。更多的研究证实这些部位的病变更多的是由于衣原体反复感染激发出的免疫病理改变,而确定这些免疫病理改变确实由衣原体引起还需要进一步深入研究。

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【干货】低功率钬激光应用于经尿道前列腺剜除术的经验分享
良性前列腺增生(BPH)是中老年男性的常见病之一,亚洲60~69岁男性发病率为40%,70~79岁发病率为56%,手术是治疗该病的理想手段。 1.HoLEP的应用现状 多年来“经尿道前列腺切除术(TURP)”被当做良性前列腺增生手术的金标准。但术中出血较多(尤其是腺体组织大于60毫升、大腺体血供丰富),组织残留率高、前列腺尖部腺体结节残留,再手术率高易括约肌损伤引起尿失禁,术后继发出血,膀胱颈挛缩及术中灌冼液吸收过多可能导致电切综合征等诸多并发症。 1994年,随着钬钇铝石榴石激光(Ho:YAG钬激光)广泛推广,一项新的技术被应用于前列腺的切除手术中。由于钬激光具有良好的切割、组织气化和凝固止血的效果,故经尿道钬激光前列腺剜除术(HoLEP)减少了前列腺切除术中和术后的出血,缩短了术后膀胱冲洗、留置导管和住院时间。经国内外经10余年的实践与不断改进完善,现已大有逐步取代传统的TURP以及经尿道前列腺等离子切除术(PKRP),从而成为新的前列腺手术“白金标准”的趋势。 目前,HoLEP已被广泛采用,具有并发症低少、住院日短、解除膀胱出口梗阻较TURP优越、疗效与开放性手术相似、可用于治疗大体积前列腺、可用于接受抗凝治疗的BPH患者。同时,HOLEP与TURP相比有低的再手术率,从长远来讲有可能提高效价比,且学习曲线并不长、学习过程安全。 2.低功率钬激光的在HoLEP的应用 开展HoLEP所需要设备包括有光纤通道的激光专用内窥镜、高清显示系统(可与电子膀胱镜共用显示器)、钬激光(推荐功率2.3J×40Hz=80瓦)或低功率钬激光(60瓦以下)和组织粉碎器。 1996年,美国奥克兰大学Gilling等报道应用此技术获得了令人鼓舞的结果:患者术后6个月Qmax平均增高近200%,AUA症状评分下降了约80%,再导尿率不足为5%;尽管多数患者仍有尿痛、尿频,但明显低于TURP手术,只有1.5%的患者因严重的血尿再次入院,消除了钬激光狭窄的热损伤区可能对血运丰富的前列腺止血不满意的担心,同时其凝固特性足以封闭静脉腔道、防止灌洗液的吸收,患者术后未出现明显的低钠血症或TURP综合症,未发现膀胱颈孪缩,仅1例患者出现尿道狭窄。随后,低功率钬激光是不是能完成HoLEP手术成为关注的“焦点”。 国内从2006年开始,浙江省率先首先开展经尿道前列腺钬激光切除术,随着钬激光的普及,众多专家都在大力推广HoLEP,并在解剖以及手术技巧上有更清晰的闸述,使越来越多的泌尿外科医生尝试该术式并取得成功。与此同时,多家基层医院也购置低功率钬激光,因其非常事宜在基医院推广。     (1)低功率钬激光的定义 低功率钬激光是指功率60瓦以下钬激光,可以用于结石粉碎、阻止切割和凝固。   (2)低功率钬激光的优势 低功率钬激光HoLEP优于TURP主要有以下几方面(与电切和高功率钬激光相比): ①低功率钬激光爆破效果好、止血效果稍差、但是通过熟练操作可以满足止血需要:术中首先切出两条标志沟,一方面可以阻断进入前列腺的主要血管,另一方面为下面的前列腺各叶的切除设立解剖标志,整个手术过程几乎在肉眼看不到明显出血的情况下进行;术后绝大多数患者不需要膀胱冲洗。 ②手术时间明显缩短,每分钟平均切除前列腺组织有所提高:一方面与钬激光止血效果满意,术中用于止血的时间减少有关;另一方面HoLEP将增生的前列腺从包膜分块剜除也加快了手术速度;Gilling形容在术中用光纤如同“伸入尿道的食指”沿增生腺体与外科包膜之间潜在间隙将前列腺整块剜除称HoLEP,可达到与开放手术完全相同的解剖学目标。 ③由于钬激光良好的切割功能与止血功能,减少了术中静脉被切开的机会,切割前列腺时不产生电流,术中灌先液可以应用与血浆等渗的生理盐水,有效地避免了TURP综合征的发生、降低了电流导致的尿道狭窄发生率,对手术时间和前列腺重量无明确的限制。 ④由于TURP术中可能出血较多,对于凝血机制有障碍、正在接受抗疑治疗的患者,行TURP术风险较大,而HoLEP风险明显小很多。 ⑤国内外多项研究已表明,在术后的随访中证实,HoLEP术后与TURP术后疗效相比,HoLEP手术优于电切手术。 ⑥HoLEP患者住院时间较TURP平均少1~2天,具有一定优势,也符合现行医保政策。 (3)低功率钬激光的操作要点 虽然低功率HoLEP与传统前列腺手术相比有相同甚至更好的近期及远期疗效,但熟练手术需要一定量手术经验积累,医生有TURP操作基础会很快掌握,也适合有低功率钬激光(60瓦以下)的单位推广。同时,低功率钬激光前列腺剜除可以满足手术需要,其速度和效率与操作者熟练程度有关,术中止血过程需要耐心、有熟练的技巧。 为控制医疗完全,初开展该项技术时,仍需掌握以下几点: ①严格掌握手术适应证; ②初始患者选择前列腺大小适中,尽量不选择小体积前列腺; ③术中组织粉碎器注意勿损伤膀胱(如无粉碎器,可以使用电切或等离子粉碎组织、埃里克吸引器取出标本); ④术后随访及时,及早发现远期并发症。 3.小结 BPH治疗的“金标准”会随着新技术设备应用改写,HoLEP有可能成为未来前列腺增生“超金标准”。HoLEP的主要优点包括术中、术后出血少,降低输血率和缩短术后导尿和住院时间,激光手术的共同特点是术中出血相对较少及无TURS,尤其适合于高危因素的患者(如高龄、贫血、重要脏器功能减退等)。而低功率HoLEP在缓解膀胱出口梗住、减少出血量、TURS发生率、缩短置管和住院时间等方面具有优势,用于BPH治疗可提高激光利用率。同时,低功率钬激光HoLEP节省医疗投入、患者医疗费用支出,符合现行医保政策,是高危、特殊患者治疗又一新选择。   专家介绍 马德青,滑县中心医院,副主任医师。 九三学社委员,河南省滑县中心医院泌尿外科主任,滑县“十大优秀工匠”、安阳市“五一”劳动奖章获得者。 中华医学会泌尿外科分会青年委员会科学普及与传播组委员、中国性医学会基层泌尿男科分会副主任委员、河南省医学会男科分会前列腺学组副组长、河南省中西医结合学会泌尿外科分会前列腺学组副组长,河南省抗癌协会泌尿生殖肿瘤分会常务委员、中国性学会中部专家分会常务委员兼副秘书长、中国泌尿系结石联盟华南基地河南中心委员、河南省抗癌协会肿瘤靶向治疗委员会青年委员、河南省中西医结合微创学会委员、安阳市抗癌协会泌尿生殖肿瘤专业常务委员、安阳市医学会泌尿外科分会常务委员。  长期从事泌尿外科工作、致力于男性下尿路疾病研究、对内窥镜下前列腺良性增生治疗有着丰富经验、2000年率先在河南省开展经尿道前列腺汽化电切(TURP),在基层医院率先引进并开展大功率钬激光、绿激光对良性前列腺增生的治疗,迄今为止完成经尿道前列腺良性增生手术5000余例,其中经尿道前列腺汽化电切3000余例、经尿道前列腺激光(980nm、532nm、1470nm以及钬激光等)气化切除(解剖性剜除)2000多例。撰写论文数篇,国家发明专利7项。
2020-01-07